雙槽梯度PCR儀其實(shí)就是將多個(gè)的PCR反應(yīng)放在一起做，不用一次一次的作很多次，可以很快的找出適合的退火溫度，或者說可以在適合的退火溫度下擴(kuò)增出目的條帶。除具標(biāo)準(zhǔn)PCR儀功能外，其梯度模塊還能同時(shí)進(jìn)行多個(gè)不同退火溫度的PCR反應(yīng)，在梯度模塊上，可實(shí)現(xiàn)對(duì)梯度溫度和梯度寬度等參數(shù)的調(diào)整，自由編程溫度，梯度實(shí)現(xiàn)不同樣品的退火溫度并同時(shí)進(jìn)行熱循環(huán)。僅一次實(shí)驗(yàn)就能確定特定體系相應(yīng)的退火溫度。從而可在短時(shí)間內(nèi)對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化，大大提高PCR科研效率。

 

　　雙槽梯度PCR儀的常見問題及現(xiàn)場(chǎng)解決方案如下：

 

　　1、梯度PCR儀在產(chǎn)物序列中引入了錯(cuò)誤，這大多是由于聚合酶忠實(shí)性低或者循環(huán)數(shù)太多，這時(shí)需要使用帶有校正活性的熱穩(wěn)定聚合酶，同時(shí)降低循環(huán)數(shù)。此外，四種dNTP的濃度不同也會(huì)出現(xiàn)該問題，此時(shí)應(yīng)制備新的濃度相同的dNTP混合物。

 

　　2、PCR跑膠，目的條帶很亮，但是邊沿不清楚，前后有拖尾現(xiàn)象。出現(xiàn)這樣的問題，則需要進(jìn)行細(xì)致的分析，因?yàn)橐鹪搯栴}的可能很多。可先檢查是否模板質(zhì)量問題，如有降解等，模板應(yīng)避免反復(fù)凍融。也有可能是抽提RNA時(shí)有污染，則需要重新抽提RNA。此外，也可能是非特異性擴(kuò)增引發(fā)該問題，可提高退火溫度，少循環(huán)次數(shù)。電泳緩沖液時(shí)間太長，ph值和鹽離子濃度明顯改變、電泳時(shí)電壓太高、電泳液過久沒換，電泳膠臟了等都可能引發(fā)該問題。如果不是由上述原因引起，則進(jìn)一步檢查加樣量是否過大，制膠過程中膠孔是否制好，EB是否沖洗干凈、模板中是否混有基因組DNA或蛋白等。也需考慮是否擴(kuò)增的條件不合適。針對(duì)具體原因再采取相應(yīng)的措施。